nAchR6GE突变导致甜菜

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多杀菌素(Spinosad)是当前甜菜夜蛾(Spodopteraexigua)防治的主要药剂之一,其作用于昆虫烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR),引起受体构象的改变,致使配体门控离子通道打开,引起害虫震颤和麻痹,最终导致害虫死亡。利用基因编辑技术,nAChRα6亚基已被证实是昆虫中多杀菌素类杀虫剂的靶标位点。近年来,已在棕榈蓟马(Thripspalmi)和番茄潜叶蛾(Tutaabsoluta)的抗多杀菌素品系中,发现nAChRα6外显子9的一个点突变(GE)可导致对多杀菌素产生高度抗性。但迄今为止,还没有获得体内功能性证据支持该突变参与了鳞翅目害虫对多杀菌素的抗性。本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,将GE突变体引入甜菜夜蛾敏感品系WH-S的nAChRα6中。RT-PCR和测序证实,该突变存在于E编辑品系的nAChR转录本的第9外显子上(图1)。

图1CRISPR/Cas9基因编辑技术介导的Seα6GE突变

生物测定结果表明,与未编辑的敏感品系WH-S相比,E编辑品系对多杀菌素和乙基多杀菌素分别具有倍和倍抗性,这个结果直接证实了甜菜夜蛾nAChRα6亚基GE突变可导致甜菜夜蛾对多杀菌素产生高水平抗性。遗传分析表明该品系基因编辑的抗性性状为常染色体不完全隐性遗传。本研究采用反向遗传学的方法验证了甜菜夜蛾的nAChRα6的GE突变在多杀菌素抗性中的功能作用,并为利用CRISPR/Cas9基因编辑技术确认候选靶标位点突变在杀虫剂抗性中的作用提供了范例。西北农林科技大学左亚运讲师和硕士生薛雨欣为论文的共同第一作者,胡兆农教授为通讯作者。本研究获得国家自然科学基金项目(和31973)、中国博士后科学基金项目(M)和西北农林科技大学科研启动基金项目(Z)的资助。

原文信息:

Zuo,Y.Y.,Xue,Y.X.,Wang,Z.Y.,Ren,X.,Aioub,A.A.,Wu,Y.D.,Yang,Y.H.,Hu,Z.N.().KnockinoftheGEmutationofthenicotinicacetylcholinereceptor(nAChR)α6confershighlevelsofresistancetospinosynsinSpodopteraexigua.InsectScience,29(2),–.

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